參考原理:血液中單個(gè)蛋白質(zhì)分子的檢測有助于識別許多新的診斷性蛋白質(zhì)標(biāo)記物。我們報(bào)告了一種同時(shí)檢測數(shù)百至數(shù)千個(gè)單獨(dú)蛋白質(zhì)分子的方法,該方法能夠檢測到非常低濃度的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)被捕獲在顯微珠上,并用酶標(biāo)記,每個(gè)顯微珠上有一個(gè)或零個(gè)酶標(biāo)記的蛋白質(zhì)。通過將這些顯微珠分離成50飛米的陣列反應(yīng)室,單個(gè)蛋白質(zhì)可以通過熒光想象檢測到。通過單化這些陣列中的分子,~10-20種酶可以在100μL(~10?19M)中檢測到。單個(gè)基于酶標(biāo)記的分子酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(數(shù)字ELISA)能夠檢測血清中臨床相關(guān)的蛋白質(zhì),其濃度(<10?15M)遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)ELISA3-5。數(shù)字ELISA在所有接受防冶性前列腺切除術(shù)的患者血清中檢測到前列腺特異性抗原,比較低至14fmol/mL(0.4fmol)。
使用現(xiàn)有平臺就能做的單分子免疫檢測;單分子技術(shù)數(shù)字ELISA芯片
芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA,我們?yōu)槭裁茨茏龅剑慨a(chǎn)品主要原理同單分子陣列技術(shù):
非常近,已經(jīng)描述了兩種數(shù)字蛋白質(zhì)測量方法,這些方法能夠提高對單分子水平的靈敏度。一種方法依賴于在固相上形成免疫三明治復(fù)合物,然后化學(xué)解離并通過激光計(jì)數(shù)每個(gè)分子。第二種方法由美國開發(fā),依賴于單分子陣列和同時(shí)計(jì)數(shù)單分子捕獲微珠。這兩種方法都能將檢測能力的下限降低10倍或更多,與增強(qiáng)的模擬放大方法相比,但后者技術(shù)也易于與高通量自動化儀器兼容,用于ELISA試劑處理。通過使用大量微孔陣列,可以同時(shí)獲取和查詢數(shù)百到數(shù)萬個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),實(shí)現(xiàn)快速數(shù)據(jù)采集和穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)。此外,從陣列中可能獲得的快速數(shù)據(jù)采集可以應(yīng)用于預(yù)編碼具有不同熒光特性的多個(gè)微珠亞群,從而在單分子水平上實(shí)現(xiàn)高通量多重分析。 微型數(shù)字ELISA穩(wěn)定性單分子 POCT 芯片檢測 IL-6 自動版低至 0.5pg/ml,手動版 1pg/ml,線性趨勢良好。
芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品
每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測
動力學(xué)上,對于200,000個(gè)微球分散在100μL中,珠子之間的平均距離約為80μm。大小為TNF-α和PSA(分別為17.3和30kDa)的蛋白質(zhì)將在不到1min的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)散80μm。表明,在2小時(shí)的孵育過程中,蛋白質(zhì)分子的捕獲不會受到限制動力學(xué)上。其次,必須有足夠的珠子被加載到陣列上以限制泊松噪聲。200,000個(gè)珠子加載到50,000孔陣列中,通常會導(dǎo)致20,000–30,000個(gè)微球被困在1mL孔中。對于典型的背景信號為1%活性微球(見下文),這種裝載導(dǎo)致背景信號為200-300個(gè)活性微球檢測到,對應(yīng)于泊松噪聲的可接受變異系數(shù)(CV)為6-7%。第三,過高的微球濃度可能導(dǎo)致:a)非特異性結(jié)合增加,降低信噪比;以及b)分析物與微球的比例過低,導(dǎo)致活性微球的比例過低,從而導(dǎo)致泊松噪聲引起的高CV。這些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人第5頁因素意味著每100μLoftest樣品含有20萬到100萬顆珠子是比較好的數(shù)字ELISA。同時(shí),為了獲得可接受的背景信號(1%)和泊松噪聲)。
芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA高敏檢測產(chǎn)品,使用現(xiàn)有平臺就能做的單分子免疫檢測;
參考的其他高靈敏檢測方法: 具有以下特點(diǎn): 多重、超敏、微量、極速 靈活、開放!
兩種更多測試的模擬分析信號放大技術(shù)是免疫PCR和生物條形碼分析。免疫PCR通過將檢測抗體標(biāo)記為DNA分子,然后使用PCR進(jìn)行擴(kuò)增和定量,從而提高靈敏度。生物條形碼分析利用了與DNA“條形碼”標(biāo)記的抗分析物納米顆粒,這些納米顆粒在與捕獲在金微粒上的分析物結(jié)合后,從納米顆粒上脫雜以進(jìn)行定量。這兩種方法相對于傳統(tǒng)免疫分析法的靈敏度提高了10到100倍,但尚未整合到所需的全自動系統(tǒng)中,也未用于多重分析。為了比較大限度地加速藥物發(fā)現(xiàn)、驗(yàn)證新型生物標(biāo)志物并將分子水平診斷引入臨床主流,需要一種具有高效率、高質(zhì)量數(shù)據(jù)和成本效益的穩(wěn)健、多重超靈敏蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。微量樣本超多重檢測芯片:亞pg級靈敏度與高通量的協(xié)同創(chuàng)新,微量樣本超多重檢測芯片突破傳統(tǒng)技術(shù)限制,單通道**多設(shè)計(jì)21個(gè)檢測區(qū),單個(gè)芯片并聯(lián)8-16個(gè)**通道,檢測速度達(dá)288-336測試/小時(shí),性能媲美化學(xué)發(fā)光技術(shù),靈敏度達(dá)亞pg級別。其“省樣本、省耗材、省空間”優(yōu)勢***:5μl微量進(jìn)樣適配稀缺樣本,21項(xiàng)指標(biāo)共享一套耗材降低成本,桌面式掃描儀節(jié)省實(shí)驗(yàn)室空間。在**普查中,該芯片可同時(shí)篩查29種肺*標(biāo)記物,篩選特異性>80%的組合(如CEA、SA、CA242),提高早期診斷準(zhǔn)確性;在炎癥因子檢測中,對IL-1β、IL-6等低豐度細(xì)胞因子的檢測線性范圍寬泛,為疾病早期***篩查提供了高效解決方案,尤其適合大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查與個(gè)體化醫(yī)療中的多因子分析。POCT 芯片卡片式設(shè)計(jì)占地小,全自動化操作,適用于院前急救、EICU 等緊急場景。微型數(shù)字ELISA穩(wěn)定性
單分子POCT產(chǎn)品-數(shù)字化ELISA芯片,幫您數(shù)字化高靈敏檢測,且微量樣本多重指標(biāo)檢測;單分子技術(shù)數(shù)字ELISA芯片
結(jié)核病活動期的高靈敏篩查方案:針對結(jié)核桿菌***早期細(xì)胞因子表達(dá)極低的特點(diǎn),芯棄疾芯片通過超敏數(shù)字ELISA技術(shù)(檢測限0.2pg/mL)實(shí)現(xiàn)IL-6、IL-18等標(biāo)志物的精細(xì)檢測。在活動性結(jié)核患者中,血清IL-6水平***高于潛伏***組(中位數(shù)12.5pg/mLvs.1.8pg/mL,p<0.01),聯(lián)合VEGF(>30pg/mL)與IP-10(>150pg/mL)檢測可提高診斷特異性至98%。芯片支持連續(xù)監(jiān)測(每周1次),動態(tài)追蹤***響應(yīng)(如抗結(jié)核***4周后IL-6下降>50%提示有效),誤診率從傳統(tǒng)方法的15%降至5%以下。在耐藥結(jié)核篩查中,芯片可檢測利福平耐藥相關(guān)蛋白(rpoB突變),指導(dǎo)個(gè)體化用***案,***成功率提升30%。單分子技術(shù)數(shù)字ELISA芯片