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上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

來源: 發布時間:2024-06-18

由于蛋白質的O-糖模式的異質性和O-糖結構的OpeRATOR特異性,形成了重疊的肽,從而可以獲得O-糖位點的完整圖譜為了進行比較,相同材料的標準胰蛋白酶消化物, 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進行O-糖位點定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產生攜帶O-糖的糖肽,并能夠使用質譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點的示意圖。倍篤生物代理多條產品線,用于聚糖分析用酶、ADC偶聯技術、QED抗體對、AAV中和抗體、IdeS蛋白酶等。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

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在抗體藥物及核酸藥物領域,倍篤生物產品線涵蓋藥物研發的全流程,主要用——RNA轉染試劑、生物活性物質純化分離用填料產品、ADC的payload抗體(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、動物造模用陽性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德國BASF、美國QED、中國君研生物、中國金傳生物、中國毫厘科技、中國再帆生物等。這些國產品牌都具有國內自研、自產能力,批次生產穩定可靠、品質可控,為行業發展提供更多國產選擇。浙江用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發為了測試選擇性,將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與 GlycOCATCH 一起孵育:洗脫O-糖基化蛋白。

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genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖:為了確認依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數據,進行了釋放的N-聚糖分析。標記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失,如半乳糖基化聚糖物種的信號丟失所示。該酶是一種有價值的工具,可降低樣品異質性,用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc;2. 實現完全糖基去除,以改善蛋白質表征;3. 可固定在即用型離心柱中。

Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協同的作用:O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區域O-聚糖位點的覆蓋率(圖3)。使用OpeRATOR鑒定對應于所有13個O-聚糖位點的肽,而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個位點。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR (1) 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好,此處由 S186 和 T245 位點缺乏消化來表明。此外,ImpaRATOR 在兩個相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解,如 S213 位點酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點酶解肽的低強度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品(T184-S199和T200-H204;圖2b和d),而在ImpaRATOR消化的樣品中,具有漏裂的相應肽(S184-H204)的強度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點覆蓋率,但使用ImpaRATOR進行消化可以表征O-聚糖結構,包括唾液酸化物種。例如,條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應該與使用OpeRATOR的消化進行比較,在OpeRATOR中,必須去除唾液酸才能產生酶活性,這意味著有關唾液酸化的信息丟失。總而言之,ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關聚糖組成和 O-聚糖位點的完整信息。親和純化微離心柱,SialEXO 凍干 200 單位,OpeRATOR 凍干 200 單位。

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Core 1型O-聚糖的水解:O-糖基化不僅難以研究,其自然異質性也會導致其他分析出現問題。例如,由于樣品中存在許多不同的糖型,因此對完整或中等水平的重糖基化蛋白質進行質譜分析可能非常困難。酶法去除N-聚糖的解決方案已經存在多年,Genvois的PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰性,現有的O-糖釋放化學方法通常會導致蛋白質發生重大修飾,因此不太適合下游分析。1. 用于方法開發的靈活產品形式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。FucosEXO 是α-巖藻糖苷酶混合物。安徽N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗體;上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

GlycOCATCH?親和純化:用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽親和純化的富集樹脂。GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供。該產品包含:4 個 GlycOCATCH 親和純化微離心柱,每個柱能夠結合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白(總共 200 μg)。Genovis的SialEXO 凍干 200 單位,用于去除唾液酸;OpeRATOR 凍干 200 單位,用于結合的 O-糖蛋白的可選洗脫方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集;2. 復雜樣品的特異性凈化;3. 用于改進 MS 分析的樣品制備。O-糖基化蛋白和肽的特異性富集:O-連接聚糖參與多種生物過程,包括抑制病原體引起的gan染、炎癥反應、造血和細胞信號傳導。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

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