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來源: 發(fā)布時間:2022-11-11

鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4)在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4.5混合管中的物質并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,混勻,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6)使用時,無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原醋酸溶解:在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。溫州鼠尾膠原單價

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鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。結果與結論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細胞存活率及細胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,細胞凋亡率及細胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性。合肥太原鼠尾膠原鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗長時程的記錄。

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鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,倒入0.5mL自組裝液,室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中,將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL;滴加1mol/L的氯化氫,調(diào)節(jié)酸堿度至7.4,然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉),約16滴/min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。

膠原蛋白的功效與作用:1、膠原蛋白中含有大量甘氨酸,在人體內(nèi)不僅參與合成膠原,而且還是大腦細胞中是一種克制性遞質,以產(chǎn)生對的安靜作用,對焦慮癥、神經(jīng)衰弱等有良好的治好作用膠原蛋白食品,在胃里可以克制蛋白質因胃酸作用引起的凝聚作用,從而有利于食物的消化,還有克制胃酸和胃原酶分泌的作用,可減輕胃潰瘍患者疼痛,促進胃潰瘍愈合。2、膠原蛋白是身體免疫作用中負責重要功能的阿米巴細胞清掃異物的感知器,因此對預防疾病很有幫助。可提高免疫機能、克制細胞、活化細胞機能、活化筋骨、治好關節(jié)炎及酸痛。鼠尾膠原蛋白的用途很普遍,可用于化妝品,工業(yè)和食品生產(chǎn)等領域。

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三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結),立即混勻。鼠尾膠原醋酸溶解:不建議用過濾的方法無菌化。濟南鼠尾膠原廠家推薦

建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。溫州鼠尾膠原單價

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,模擬真實的生長環(huán)境,使細胞在三維環(huán)境中生長。1,在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上,pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法:1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中。溫州鼠尾膠原單價

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