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連云港快速冷凍顯微鏡技術特點

來源: 發布時間:2023-11-16

冷凍電鏡技術測定結構的幾種方法:X射線晶體學、NMR、和冷凍電鏡技術各有優缺點,將這幾種方法結合共同研究結構與功能將使結構生物學家對所研究的分子有更為全部的理解,而這些信息是單用任何一個方法所無法獲得的。將X射線晶體模型與經電鏡獲得的密度圖重合可以對電鏡三維重構的結構作更詳盡的解釋,例如將牛的水通道(AQP1,與人的有90%同源性)的高分辨率的晶體結構與先前用冷凍電鏡技術重構出來的人的中等分辨率水通道的三維結構進行比較,可以進一步確定冷凍電鏡獲得的中等分辨率的結構,同時也顯示出了冷凍電鏡技術的優勢和局限性。另一方面,較低分辨率的電鏡三維重構模型可以用來解釋病毒或大分子的晶體結構。而且,將X射線晶體的精細結構與冷凍電鏡的重構模型結合構建生物大分子復合物在發揮功生物學功能過程中出現的構像變化模型。這很大程度增加了我們對于復雜分子的活動機制的理解。電子顯微技術,成像技術,計算機技術,生物信息技術等不同學科的結合,將為我們提供研究生命現象與本質的強有力的手段。冷凍電鏡技術既完美契合了結構生物學的基礎研究,又能夠助力加速基于結構的藥物研發。連云港快速冷凍顯微鏡技術特點

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單顆粒冷凍電鏡技術的顆粒挑選:接下來需要從原始數據中篩選出顆粒投影,也被稱為“顆粒挑選”,顆粒挑選的好壞也將影響所有后續的分析和處理過程,是一個重要并且繁瑣的步驟。顆粒挑選方式可以分為手動挑選、半自動挑選和完全自動挑選這幾種。在早期的分析中,對于結構的了解還非常少,優先考慮的都是人工挑選。但是自動的顆粒圖像獲取方法的出現使得在很短時間內可以收集數十萬張顆粒圖像,人工挑選大量的顆粒圖像不太現實,并且人工的挑選通常會過于集中于某一類顆粒圖像,導致遺漏和偏差。半自動和全自動的方法主要有以下三類:(1)通過例如降噪、反襯增強、邊緣算子等圖像形態學方法搜索區域,基于數字圖像處理學的原理,將顆粒圖像與背景分離開來。(2)基于模板的方法,通過掃描數據圖像和已知的模板比較來挑選出潛在的顆粒圖像,模板的來源通常為手動選出的數據圖像中較為清晰的顆粒圖像,或者是已知結構的投影。(3)結合無模板和有模板的方法,通過一些有監督的機器學習算法進行顆粒挑選。襄陽冷凍電鏡技術冷凍電鏡技術之冷凍透射電鏡優點:加速電壓高,電子能穿透厚樣品。

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冷凍電鏡技術中的電子斷層掃描技術與單顆粒分析法的比較:單顆粒分析法:它的優點:解析生物大分子的理論分辨率可達原子級;樣品受總輻射值小;對稱顆粒的解析分辨率更高;分子量越大,結果越好;電子斷層掃描技術:優點:簡單直接;對樣品的要求較低;常用于對細胞或者生物組織結構的三維重構;但是,對同一樣品位置多次拍照時,電子束對樣品的輻照損傷就會成為了比較嚴重的問題;當樣品旋轉角度受到電子束透過樣品厚度能力的限制。

冷凍電鏡技術的應用場景:冷凍電鏡主要應用在結構生物學和材料科學當中,如在2020戴口罩戴口罩中研究人員通過冷凍電鏡技術在解析病毒結構、推測其侵染人體細胞的路徑等傳播原理發揮了重要作用,研究人員將戴口罩的結構與其他幾種冠狀病毒進行了比較,發現2019-nCoV的S蛋白整體結構與SARS病毒S蛋白的整體結構相似,各個結構之間具有高度同源性。在材料科學的應用中,冷凍電鏡技術在一些對電子束、熱敏感材料,如鈣鈦礦材料、某些高分子材料、水凝膠、量子點等精細結構的物理表征與機理研究中也具有巨大的應用潛力。冷凍電鏡技術之冷凍蝕刻電子顯微鏡優點:能耐受電子束轟擊和長期保存。

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單顆粒冷凍電鏡技術的圖像處理技術:經過多年的發展,目前冷凍電鏡的數據處理部分主要包含了以下的流程:(1)襯度傳遞函數的修正(CTFcorrection);(2)樣品分子投影數據的篩選(particleselection);(3)二維投影數據的分類和降噪(2Danalysis);(4)三維模型的重構和優化(3Dreconstructionandrefinement);(5)多重構象的結構分析(heterogeneityanalysis);(6)對重建結構分辨率的分析(structureresolutionassessment);(7)結合生物化學原理和實驗數據對三維結構的解讀(modelinterpretationandvalidation)。主要使用的幾種冷凍電子顯微學技術結構解析方法包括:電子晶體學、單顆粒重構技術、電子斷層掃描等。合肥冷凍電子顯微鏡技術哪家好

冷凍電鏡技術中的單顆粒分析法在分析具有同質性結構的樣品時表現出更方便、更優異的成像能力。連云港快速冷凍顯微鏡技術特點

為什么要做冷凍透射電子顯微鏡技術服務?a.反應樣品溶液里結構:如有機分子組裝成的微球、囊泡、膠束、納米管、片層、水凝膠結構等(往往一般透射拍攝到的都是溶液揮發干了之后的結構,但是這樣的結構無論是形貌和尺寸和溶液里都有一定差別,現在好多文章的審稿意見都會需要這類結構的透射照片在溶液里的真實形貌,說簡單了就是讓補一個冷凍透射);b.不穩定的納米結構:比如經不起強電子束照射的樣品(MOF、COF等若相互作用力結合的材料,如金屬配位、氫鍵相互作用、親疏水作用力、ππ堆疊等)在強電子束照射下結構會坍塌,冷凍電鏡全程在-160℃下可以做到對樣品損害較小;c.生物類分子好多都需要冷凍,因為生物分子本身都需要在水或者血液等存活,一些生物樣品構筑的一些納米結構,如納米微球、囊泡、膜、多孔材料等等。連云港快速冷凍顯微鏡技術特點

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