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東莞全自動膜片鉗電生理技術應用

來源: 發布時間:2023-07-28

膜片鉗電生理技術服務只適用于藥物的初篩和二次篩選,且對樣本有很高的選擇性,而傳統的膜片鉗技術可適用于各種樣本,應用范圍廣,能夠分析檢測所有的離子通道類型,同時能夠分析離子通道的動力學特征。因此目前,傳統膜片鉗技術仍然是不可替代的。在進行膜片鉗實驗時,玻璃電極給負壓并吸住細胞,形成高阻封接,破膜,給藥,記錄數據的過程,都需要細胞保持比較好的活性狀態,才能更加高效的獲得有效數據。因此細胞的穩定性就成了評估樣品好壞的關鍵。膜片鉗芯片技術是繼細胞芯片之后的又一種嶄新的分析細胞電生理參數的芯片技術.由于該芯片除了具有傳統膜片鉗的高分辨和高準確性特點外,還具有高通量、自動化以及細胞多通道參數和細胞網絡參數在線和實時檢測等優點.因此,該芯片技術將很大促進細胞離子通道、細胞網絡傳導以及藥物篩選的研究和應用。全自動膜片鉗系統技術指標:藥液交換迅速。細胞內、外液的交換是在平面芯片上進行。東莞全自動膜片鉗電生理技術應用

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膜片鉗電生理技術服務的數據如何處理:1.內面向外式膜片細胞內外和電極內的溶液均可調控,既能較容易地改變細胞內的離子或物質濃度,又能把酶等直接加于膜的內側面,適宜研究胞內物質對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側物質,且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細胞內鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細胞內和第二信使與通道的調節作用。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側,可以任意改變膜外物質的濃度,有利于研究離子、遞質對膜外表面的作用,多用于研究細胞膜外側受體控制的離子通道。這些受體直接作用于離子通道,而不需經過第二信使系統。因細胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實驗中難以改變胞內成分,而且電極管內必須充以低鈣液。南通細胞生物學膜片鉗技術膜片鉗的應用:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位施加各種濃度的藥物來研究。

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膜片鉗記錄的幾種形式:內面向外膜片(inside-out patch) 高阻封接形成后,在將微管電極輕輕提起,使其與細胞分離,電極端形成密封小泡,在空氣中短暫暴露幾秒鐘后,小泡破裂再回到溶液中就得到“內面向外”膜片。此時膜片兩側的膜電位由固定電位和電壓脈沖控制。浴槽電位是地電位,膜電位等于玻管電位的負值。如放大器的電流監視器輸出是非反向的,則輸出將與膜電流(Im)的負值相等。外面向外膜片(out-side patch) 高阻封接形成后,繼續以負壓抽吸,膜片破裂再將玻管慢慢地從細胞表面垂直地提起,斷端游離部分自行融合成脂質雙層,此時高阻封接仍然存在。而膜外側面接觸浴槽液。

膜片鉗技術基本原理與特點:又由于玻璃微電極管徑很小,其下膜面積光約1 μm2,在這么小的面積上離子通道數量很少,一般只有一個或幾個通道,經這一個或幾個通道流出的離子數量相對于整個細胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略,那么,只要保持電極內電位不變,則電極下的一小片細胞膜兩側的電位差就不變,從而實現電位固定另外,高阻封接技術還很大降低了電流記錄的背景噪聲,從而戲劇性地提高了時間、空間及電流分辨率,如時間分辨率可達10 μs、空間分辨率可達1平方微米及電流分辨率可達10-12 A。膜片鉗技術的應用范圍:對藥物作用機制的研究。

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膜片鉗電生理技術服務記錄的幾種形式:全細胞記錄構型(whole-cell recording) 高阻封接形成后,繼續以負壓抽吸使電極管內細胞膜破裂,電極胞內液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,或將玻管連到標準高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細胞全細胞電流可達nA級,全細胞鉗的串聯電阻(玻管和細胞內部之間的電阻)應當補償。任何流經膜的電流均流經這一電阻,所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細胞內的真正電位。電流愈大,愈需對串聯電阻進行補償。膜片鉗的應用:與藥物作用有關的心肌離子通道。細胞生物學腦片膜片鉗網站

膜片鉗使用操作注意:禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。東莞全自動膜片鉗電生理技術應用

膜片鉗電生理記錄技術:膜片鉗技術的基本原理:膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數量級,因此封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,測量單個離子通道開放產生的微小電流,這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數,并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。將該部分細胞采用負壓吸破,可以形成比較常見的全細胞記錄模式,可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。東莞全自動膜片鉗電生理技術應用

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