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來源: 發布時間:2022-04-24

細胞培養中出現黑點是污染嗎?如何處理?一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現可能與以下幾種情況有關:細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;血清質量不好,反復凍融的結果;配制培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。胎牛血清起酸堿度緩沖液作用。淮安無外泌體血清

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非正規胎牛血清的產品會存在很多的問題:疫區來源,無合格質檢使胎牛血清存在生物學污染:支原體、噬菌體、病毒、原蟲等,會直接影響實驗的結果和穩定。工藝不規范,導致采集的原血放置時間過長或操作不當導致溶血,血液中血細胞裂解,血清顏色呈紅色或暗紅色,這樣的血清含有許多胞內產物,里面很多物質都會對細胞有刺激作用,影響實驗的穩定性和數據的真實性。血清批次不穩定,添加來補?很多不法商販拿到低廉的疫區原料血清進行加工生產,為了保障血清的培養效果會對血清進行處理,較為常見的是添加、轉鐵蛋白、BSA、生長因子等,還有的會和新生牛血清、培養基等勾兌,更有甚者用的根本就不是牛血清,此類操作對所有生物學實驗都有巨大的影響。金華無外泌體血清多少錢胎牛血清的其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。

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國際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性,不會產生沉淀,同時能縮短血清融化時間。關于胎牛血清的滅活:真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補體,如果針對補體滅活的話,就不需要。其他情況根據實驗設計來決定。胎牛血清的濃度:胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎培養基中,混合后配成完全培養基。曾有文獻報道,不同胎牛血清濃度對細胞存在一定的影響,尤其是干細胞和原代細胞。具體很好濃度需要用戶根據自己的實驗來確定,以既保證培養的效果,又避免血清的浪費。

血清的安全風險因素主要有以下方面:地理因素,地理因素包括血清產地的流行病學趨勢、基礎設施情況以及血源供應量。措施得當可以預防能避免的動物疾病,同時產地國穩定可靠的基礎設施,對保證供應鏈的安全也十分必要。血源是否充足則決定了血清是否可源源不斷地持續供應。生產,生產遵循cGMP指南,則可保證血清質量,降低有關無菌過濾、摻加和標簽錯誤的風險。cGMP為現場審核的開展提供了框架。生產過程中對血清進行有效的無菌過濾也是十分重要的。產品質控,有效的無菌過濾使得細菌污染的風險很低。對于支原體和病毒篩查,一些相關規范內部存在一定的方法靈活性,這使得采取不同方法進行支原體和病毒篩查成為可能,并且有時使得要篩查的病毒種類無需太多。有效輻照,要進一步降低外源因子風險,可對血清進行輻照(25–40 kGy)。但輻照并不能保證病毒污染的完全去除。輻照過量會導致FBS效能下降。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物。

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血清的保存應該注意:需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月,由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。血清提供和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質、類固醇(雌二醇、睪酮、孕酮)等。莆田賽業血清哪里有賣

胎牛血清的蛋白質含量:3.5%~5.0%( w/v);血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)。淮安無外泌體血清

添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養液,因為如果培養液有沉淀的存在,會使得其中培養的細胞產生大量的黑點,除此之外,細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質,總之出現這樣的情況會極其不利于細胞的正常生長。那么為了較為大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養液中使用。注意解凍的方法:再高質量的胎牛血清也要在使用的時候堅持謹慎的原則,因此在解凍血清的時候,要細心地考慮到其解凍時體積一般會增大的特點,事先為血清預留出能夠容納膨脹體積的空間。如此一來,便不會發生污染或者容器凍裂的情況。另外較為好采用國際通用的解方式解凍血清。淮安無外泌體血清

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