聚合酶鏈式反應準備：PCR引物設計：PCR反應中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條DNA單鏈為基準（常以信息鏈為基準），5′端引物與位于待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位于待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。引物設計的基本原則：引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC很好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。聚合酶鏈反應很容易理解和使用，并迅速產生結果。無錫實時熒光PCR

PCR的反應條件：Tm=4（G+c）+（A+T），一般在45～55度，溫度低容易退火但特異性低；溫度高，不容易退火但特異性高。退火時間30秒。延伸溫度一般在70～75度這時TaqDNA聚合酶活性很高（150個/S），當引物在16個堿基以下時可采用緩慢升高溫度到70～75度的方法，使在低溫下就開始合成。一般<1KB時間1分鐘即可。當〈1KB時在較后的循環中延長擴增時間。循環次數25～30次。無產物時：取10ul擴增混合液作模板在進行PCR擴增；增加TaqDNA聚合酶濃度；增加循環次數；降低退火溫度；加靶DNA量。無錫實時熒光PCR電子PCR被提出作為分子生物學的教育工具。

聚合酶鏈式反應的試驗污染：實驗室中克隆質粒的污染：在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見。因為克隆質粒在單位容積內含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內的質粒，由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力。其污染可能性也很大。污染的監測：一個好的實驗室，要時刻注意污染的監測，考慮有無污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。重復性試驗。選擇不同區域的引物進行PCR擴增。

聚合酶鏈反應：流聚合酶鏈反應:一種偽等溫PCR方法。將溶液置于熱梯度下，而不是反復加熱和冷卻聚合酶鏈反應混合物。由此產生的熱不穩定性驅動對流流動自動將聚合酶鏈反應試劑從熱區域和冷區域打亂，從而反復啟動聚合酶鏈反應。通過利用混沌流場的出現，可以優化熱邊界條件和PCR外殼的幾何形狀等參數，以產生特異和快速的PCR。這種對流聚合酶鏈反應設置明顯降低了設備功率需求和操作時間。逆轉錄聚合酶鏈反應(逆轉錄-聚合酶鏈反應):用于從RNA中擴增DNA。逆轉錄酶將核糖核酸逆轉錄成cDNA ，然后通過聚合酶鏈反應進行擴增。逆轉錄-聚合酶鏈反應較廣用于表達譜，以確定基因的表達或鑒定RNA轉錄物的序列，包括轉錄起始和終止位點。如果基因的基因組DNA序列是已知的，逆轉錄-聚合酶鏈反應可以用來繪制基因中外顯子和內含子的位置。基因的5’端(對應于轉錄起始位點)通常通過 RACE-PCR (快速擴增cDNA末端)中。嵌套聚合酶鏈反應：通過減少DNA非特異性擴增的背景，提高DNA擴增的特異性。

聚合酶鏈反應有許多優點。它很容易理解和使用，并迅速產生結果。這項技術非常敏感，有可能產生數百萬到數十億份特定產品的拷貝，用于測序、克隆和分析。qRT-PCR具有與PCR相同的優點，同時還具有定量合成產物的優點。因此，它可以用于分析病癥、微生物或其他疾病狀態中基因表達水平的變化。聚合酶鏈反應是一種非常強大和實用的研究工具。許多疾病的未知病因的測序正在通過聚合酶鏈反應得到解決。這項技術可以幫助我們識別與已知病毒相關的未知病毒序列，從而讓我們更好地了解疾病本身。如果該過程可以進一步簡化，并且可以開發靈敏的非輻射檢測系統，PCR將在未來幾年在臨床實驗室中占據明顯地位。PCR反應的關鍵環節有模板核酸的制備，引物的質量與特異性，酶的質量及溴乙錠的使用。珠海組織熒光PCR服務

嵌套聚合酶鏈反應的兩組引物用于兩個連續的PCR。無錫實時熒光PCR

聚合酶鏈式反應：DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。但是，DNA聚合酶在高溫時會失活，因此，每次循環都得加入新的DNA聚合酶，不但操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術的應用和發展。耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發現對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。無錫實時熒光PCR