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湖南ArcticZymes中鹽核酸酶70950-150

來源: 發布時間:2024-05-31

M-SAN HQ中鹽核酸酶發揮酶活性的條件比較廣。例如,該酶適宜的鹽濃度(NaCl)范圍是0mM-225mM,能耐受400mM NaCl濃度。適宜反應溫度為20℃-37℃,能耐受4℃-40℃。Mg2+濃度大于0.5mM即可,在4-15mM范圍即可表現更高活性。跟其他核酸酶不同,M-SAN HQ中鹽核酸酶不是堿性核酸酶,其適宜pH為7.2-8.7,能耐受6.3-8.7。綜合這些特點,在生理鹽條件下,M-SAN HQ的酶活是傳統全能核酸酶的5倍左右。因此,可以說M-SAN HQ是更適合生理鹽條件下的核酸酶。M-SAN HQ中鹽核酸酶終產品放行檢測包括microbe、Fungus及內毒檢測等;湖南ArcticZymes中鹽核酸酶70950-150

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ArcticZymes Technologies有兩條產品線,分別針對分子診斷和生物藥物生產兩個領域。在分子診斷領域,產品有蝦堿酶(SAP)、UNG酶、等溫擴增酶(IsoPol)、連接酶、蛋白酶、內切核酸酶及外切核酸酶等,涉及核酸抽提、擴增及測序等應用。在生物藥物生產領域,全球創新的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases, SANs)系列產品以其獨特優勢,在細胞基因藥物及RNA藥物生產中表現出更好的性能。其中,鹽活性核酸酶SANs系列產品包含兩款產品,分別是SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶;兩款酶的差別在于發揮酶活的鹽濃度范圍分別是生理鹽濃度范圍和400-600mM高鹽濃度范圍。天津生理鹽條件中鹽核酸酶70950-160M-SAN HQ ELISA kit規格是12*8 strip,提高使用效率。

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除了獲得載體的滴度及產量,生產慢病毒更關心的指標主要是各種污染物的去除。總DNA污染的去除百分比在99.1-99.84%,總蛋白污染物的去除百分比在99.85-99.9%。針對宿主細胞的DNA(HCD)及蛋白(HCP),有報道其去除百分比分別為99.8%和99.4%。因為不僅殘存的DNA可能是個問題,而且DNA的大小以及由此引起的可能轉移整個有功能的開放閱讀框也是問題,因此監管機構對殘存DNA污染的分子量上限的要求越來越高。例如,FDA的指南‘生產用于傳染病適應癥的病毒疫苗的細胞基質和其他生物材料的特性和鑒定’中說明,殘留的細胞宿主的DNA片段不能超過一個功能基因的長度,估計在200bp左右。

經典的慢病毒載體(LV)的生產工藝如下,——三質粒系統瞬時轉染HEK293細胞系,轉染24小時后LV由轉染陽性細胞生產并排出到培養上清液中;收獲上清培養液后,加入核酸酶去除HCD污染,通過澄清步驟去除大的細胞碎片等雜質;下游純化步驟分離LV載體,純化方法包括切向流過濾TFF、色譜純化及超速離心;純化后的LV病毒顆粒經過無菌過濾,更換到優化后的配方中,灌裝并冷凍保存。每批Car-T生產時取對應量的LV病毒,切忌反復凍融,否則LV病毒會失活。ArcticZymes Technologies的研發基于北極海洋區的自然資源;

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文章作者按照經典的慢病毒載體生產流程操作,在融化、核酸酶消化、澄清、超濾等步驟留樣,分別檢測dsDNA濃度及功能性LV病毒滴度。經過分析發現,——去除主要發生在澄清環節,能去除dsDNA的80%-90%;2. M-SAN HQ中鹽核酸酶比Benzonase能更高效去除dsDNA,即M-SAN HQ組的TFF回流液中dsDNA殘留量是Benzonase組回流液的20%左右;3. LV病毒滴度在澄清環節損失30%-40%;4. M-SAN HQ組的TFF回流液中LV病毒滴度略高于Benzonase組的回流液數據。M-SAN HQ中鹽核酸酶兼容常見細胞培養基,在多種培養基條件下去除核酸污染效率更高;天津上海倍篤生物中鹽核酸酶70950

相比于全能核酸酶,在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶將染色質DNA剪切成更小片段的效率更高。湖南ArcticZymes中鹽核酸酶70950-150

ArcticZymes Technologies于2019年推出了M-SAN HQ中鹽核酸酶,2021年推出對應的M-SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中M-SAN HQ中鹽核酸酶的殘留含量,特異性的anti-M-SAN作為捕獲抗體偶聯在孔板上,辣根過氧化酶HRP標記anti-M-SAN作為檢測抗體,TMB是檢測反應底物。該試劑盒特異識別M-SAN HQ中鹽核酸酶,對其它核酸酶沒有特異性結合。它的定量范圍是0.12-7.5ng/ml;12*8strips的設計規格,使用靈活,更能降低使用成本。湖南ArcticZymes中鹽核酸酶70950-150

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