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四川人源細胞模型開發糖尿病細胞模型

來源: 發布時間:2025-03-25

HCD利用人胎兒胰腺組織中的靶向ZhongLiu發生開發了永生化人β細胞系,其中使用慢病毒載體整合了兩個轉基因,SV40大T抗原(SV40-LT)和人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)兩種轉基因均在β細胞特異性大鼠胰島素啟動子(RIP)的控制下表達。***代細胞,名為EndoC-βH1,以組成型方式表達SV40LT和hTERT,而在第二代EndoC-βH2和EndoC-βH3中,這些轉基因可在loxP介導的CRE重組后被切除,位點位于慢病毒骨架的3LTR.EndoC-βH5細胞是通過使用表達可切除的SV40LT和hTERT的慢病毒載體對人胎兒胰腺進行靶向ZhongLiu發生而獲得的.糖尿病細胞模型人B細胞系,用慢病毒載體整合了SV40大T抗原 (SV40-LT) 和人端粒酶逆轉錄酶(hTERT) 兩種轉基因。四川人源細胞模型開發糖尿病細胞模型

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根據嚙齒動物β細胞獲得的數據,葡萄糖轉運蛋白SLC2A2頭次被認為是葡萄糖傳感器蛋白。SLC2A2在人胰島細胞中的表達水平極低,表明葡萄糖在大鼠β細胞中通過SLC2A2轉運,而在人β細胞中主要通過SLC2A1和/或SLC2A3轉運。研究表明SLC2A2mRNA在EndoC-βH1細胞中表達,因此,EndoC-βH1細胞應該是一個有用的模型,用于解剖不同葡萄糖轉運體在人β細胞中的特定作用。Human cell design 構建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。II型糖尿病糖尿病細胞模型全球200+學術與制藥實驗室測試和批準糖尿病細胞模型EndoC-BH5 細胞以穩健且可重復的方式分泌胰島素以響應葡萄糖刺激。

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人原代β細胞的可用性有限,從人胰島制劑中純化β細胞具有挑戰性。在嚙齒類動物中,β細胞系自20世紀70年代初以來就已經可用,并且在研究β細胞功能方面非常有用。然而,嚙齒動物的β細胞并不是研究人類β細胞的理想選擇,因為人類和嚙齒動物的β細胞在許多方面彼此不同。例如,在嚙齒類動物中,胰島素由2個基因編碼,而在人類中,只有1個基因編碼。嚙齒動物和人類β細胞的功能差異是由于葡萄糖轉運和磷酸化在葡萄糖感知中的相對作用不同。

Humancelldesign(HCD)通過將永生化轉基因hTERT和SV40大T以及單純皰疹病毒-1胸苷激酶整合基因轉移至人胎兒胰腺中,產生EndoC-βH5細胞。擴增后使用CREjihuo去除永生化轉基因,并使用更昔洛韋消除剩余的未切除細胞,所得細胞作為可立即使用的EndoC-βH5細胞進行分發。EndoC-βH5已經成功進行了轉錄組、免疫學和的功能測定。即用型EndoC-βH5細胞顯示出高效的葡萄糖依賴性胰島素分泌。歐洲四個duli實驗室觀察并再現了強勁的10倍胰島素分泌指數。EndoC-βH5細胞響應葡萄糖以動態方式分泌胰島素。GLP1R和GIPR介導的信號增強葡萄糖刺激EndoC-βH5細胞的胰島素分泌.在表型上具有和天然胰島素相同的表達marker。

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在胰島細胞刺激中,基礎和高D-葡萄糖條件之間的刺激指數為11.6±1.8。通過應用不引起胰島素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻斷D-葡萄糖誘導的鉀通道開放劑二氮嗪(100mM),驗證了胰島素分泌對D-葡萄糖的特異性。胰島素分泌以D-葡萄糖濃度依賴性方式增加,從0mMD-葡萄糖時的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖時的679.2±39.5ng/h/106細胞。胰島素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖,分別有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/106細胞。Humancelldesign構建了EndoC-BH1,En-doC-BH3,EndoC-βH5,GLTxEndoC-βH5,HLA-A2EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優化改良,獲得的功能胰腺B細胞,無限接近天然人源胰島B細胞,其胰島素分泌功能與天然細胞類似,基于PDX1/NKX6.1關鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上(左圖),在2.8mMand11mM葡萄糖劑量下表現出10倍的胰島素分泌反應(右圖),對GLP-1R激動劑,Exendin4刺激產生明細那反饋,且可實現批量化生成,實現穩定供應.糖尿病細胞模型可用于糖尿病炎癥研究。HLA-A2糖尿病細胞模型細胞復蘇

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