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人胰腺B細(xì)胞糖尿病細(xì)胞模型促胰島素分泌增加10倍

來源: 發(fā)布時間:2024-08-18

EndoC-βH1細(xì)胞移植到小鼠體內(nèi)可以逆轉(zhuǎn)化學(xué)誘導(dǎo)的糖尿病,EndoC-βH1細(xì)胞每百萬細(xì)胞含有0.48μg胰島素,至少80代穩(wěn)定表達(dá)許多特異性β細(xì)胞標(biāo)記物,沒有任何其他胰腺細(xì)胞類型標(biāo)記物的大量表達(dá)。EndoC-βH1有潛力成為深入研究人類β細(xì)胞和藥物篩選的獨(dú)特工具,同時也是測試糖尿病替代細(xì)胞療法的有用臨床前模型。糖尿病細(xì)胞模型,EndoC-βH1、EndoC-βH3、EndoC-βH5等細(xì)胞dai biao了大規(guī)模藥物發(fā)現(xiàn)的獨(dú)特工具,為糖尿病細(xì)胞替代療法提供了臨床前模型。糖尿病細(xì)胞模型—EndoC-BH1是永生化胰島細(xì)胞,分泌的胰島素接近天然胰島細(xì)胞。人胰腺B細(xì)胞糖尿病細(xì)胞模型促胰島素分泌增加10倍

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Human Cell Design 根據(jù)法國生物倫理立法收集人類胎兒組織,獲得法國生物醫(yī)學(xué)局(巴黎)的批準(zhǔn),批準(zhǔn)號為 PFS08-005。糖尿病細(xì)胞模型應(yīng)用概括如下:細(xì)胞因子介導(dǎo)的糖尿病炎癥反應(yīng)(一/二型糖尿病):胰島β細(xì)胞保護(hù)機(jī)制研究,胰島β細(xì)胞炎癥反應(yīng)研究,誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞炎癥反應(yīng)化合物篩選;T 細(xì)胞介導(dǎo)的胰島細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)(一型糖尿病):胰島β細(xì)胞保護(hù)機(jī)制研究,T 細(xì)胞抑制機(jī)制,β細(xì)胞和 T 細(xì)胞作用機(jī)制研究。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細(xì)胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良,獲得的功能胰腺B細(xì)胞,無限接近天然人源胰島B細(xì)胞,其胰島素分泌功能與天然細(xì)胞類似,基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗(yàn)證的細(xì)胞均一性達(dá)到90%以上(左圖),在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應(yīng)(右圖),對GLP-1R激動劑, Exendin4刺激產(chǎn)生明細(xì)那反饋, 且可實(shí)現(xiàn)批量化生成,實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定供應(yīng)。天津慢病毒構(gòu)建型糖尿病細(xì)胞模型糖尿病研究中較好的胰島B細(xì)胞模型?

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根據(jù)嚙齒動物β細(xì)胞獲得的數(shù)據(jù),葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC2A2頭次被認(rèn)為是葡萄糖傳感器蛋白。SLC2A2在人胰島細(xì)胞中的表達(dá)水平極低,表明葡萄糖在大鼠β細(xì)胞中通過SLC2A2轉(zhuǎn)運(yùn),而在人β細(xì)胞中主要通過SLC2A1和/或SLC2A3轉(zhuǎn)運(yùn)。研究表明SLC2A2mRNA在EndoC-βH1細(xì)胞中表達(dá),因此,EndoC-βH1細(xì)胞應(yīng)該是一個有用的模型,用于解剖不同葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體在人β細(xì)胞中的特定作用。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細(xì)胞模型。

在 Human Cell Design 的研發(fā)過程中,科學(xué)家們采用了先進(jìn)的細(xì)胞工程技術(shù),通過基因編輯和細(xì)胞培養(yǎng)等手段,成功構(gòu)建了多個高質(zhì)量的人源胰島β細(xì)胞模型。這些細(xì)胞模型不僅在結(jié)構(gòu)上與天然胰島細(xì)胞高度相似,還能夠在功能上模擬胰島細(xì)胞的生理行為,為糖尿病研究提供了可靠的實(shí)驗(yàn)工具。HCD 的 EndoC-BH5 細(xì)胞系在糖尿病研究中具有廣泛應(yīng)用,其在高葡萄糖環(huán)境下能夠表現(xiàn)出胰島素分泌反應(yīng),為研究胰島素調(diào)節(jié)機(jī)制和開發(fā)新型抗糖尿病藥物提供了重要支持。這些細(xì)胞模型的高穩(wěn)定性和可重復(fù)性,使得研究結(jié)果更加可靠,為科學(xué)家們提供了寶貴的研究平臺。糖尿病細(xì)胞模型—EndoC-BH5 細(xì)胞是 EndoC-BH 細(xì)胞家族中的較新細(xì)胞。

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EndoC-βH5細(xì)胞是一種新型人類胰腺β細(xì)胞解決方案,可用于開發(fā)人類糖尿病模型以及藥物篩選和驗(yàn)證平臺,產(chǎn)生流程為:DNA構(gòu)建,慢病毒載體產(chǎn)生,人胎兒胰腺外植體與pTRIPDU3loxP-pY-TK-RIP405-SV40-LT和pTRIPDU3loxPpY-TK-RIP405-hTERT慢病毒載體共轉(zhuǎn)導(dǎo),移植到SCID小鼠的腎囊下,導(dǎo)致八個月后形成胰島素瘤,從而獲得EndoC-βH5。EndoC-βH1和增殖的EndoC-βH5細(xì)胞分別在Opti-β1和Ulti-b1培養(yǎng)基中的βCoat涂層塑料板上培養(yǎng)。使用胰蛋白酶(0.05%)每7天繁殖一次細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)分析表明所有EndoC-βH5細(xì)胞均呈胰島素陽性,并且在絕大多數(shù)細(xì)胞中檢測到PDX1和NK6.1表達(dá)(分別為92.3%和90%)。EndoC-βH5細(xì)胞在涂層塑料上形成小的貼壁簇。Huamn cell design(HCD)提供的糖尿病細(xì)胞模型具有高度穩(wěn)健且無批次效應(yīng)的特點(diǎn)。山東糖尿病細(xì)胞模型品質(zhì)保障

EndoC-BH1 和增殖的 EndoC-BH5 細(xì)胞分別在 Opti-B1 和 Ulti-b1 培養(yǎng)基中的 BCoat涂層塑料板上培養(yǎng)。人胰腺B細(xì)胞糖尿病細(xì)胞模型促胰島素分泌增加10倍

EndoC-βH1使用慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移從人類胎兒胰腺中產(chǎn)生功能性β細(xì)胞,這些胰腺處于發(fā)育的早期階段,即9至11周,這段時間與β細(xì)胞分化的開始相吻合(33)。整合的轉(zhuǎn)基因SV40LT受大鼠胰島素啟動子控制,在胰島素陽性細(xì)胞中特異性表達(dá)。通過使用這種靶向方法,SV40LT在新形成的β細(xì)胞中表達(dá),同時這些細(xì)胞頭次產(chǎn)生胰島素。因此,我們成功地模仿了用于產(chǎn)生功能性嚙齒動物β細(xì)胞系的轉(zhuǎn)基因方法(7,8,34),用于從人胎兒胰腺中開發(fā)功能性人β細(xì)胞系。人胰腺B細(xì)胞糖尿病細(xì)胞模型促胰島素分泌增加10倍

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