對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。
什么品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好?四川血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑
準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。 低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲存哪個品牌的GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好?
線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點:優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達質(zhì)粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞,轉(zhuǎn)染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。
哪里可以買到GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑?
線性化聚乙烯亞胺pei25,000,一種高電荷陽離子聚合物,非常容易結(jié)合于高電荷陰離子基質(zhì)。工業(yè)應(yīng)用上線性化pei可改善負電荷染料的物理外觀以調(diào)整染料的化學特性和增強染料與固相基質(zhì)的黏附能力,常用作黏附增強劑,作用同多聚賴氨酸(poly-lysine);科研應(yīng)用上;線性化pei能與dna或其他負電荷生物大分子簡單結(jié)合,正是這一特性,使得成為一種非常行之有效的載體運輸介質(zhì)(vectorcarrier),即轉(zhuǎn)染試劑。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內(nèi)客戶群體,生命科學領(lǐng)域一站式供應(yīng)鏈體系,以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢.如何辨別假的PEI轉(zhuǎn)染試劑。CHO細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么
哪款PEI轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率高呢?四川血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑
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