目前有三種在神經元上填充鈣離子指示劑的方法,且都可以用于體內和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經元中。此方法方便實驗者控制單個神經元內的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負載神經元,觀察對象為一群神經元。盡管此方法可能導致一些膠質細胞也被指示劑所標記,但提高了整體神經元的標記百分比,使研究者得以觀察到一群神經元內動作電位相關性的活動。第三種也較為常用,通過病毒轉染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。(A)單細胞注射法;(B)networkloading法;(C)通過病毒轉染使其基因編碼鈣離子指示劑(expressionofgeneticallyencodedcalciumindicators,GECI)傳統的鈣成像技術受限于顯微鏡的視野,只能對很小的一片區域進行記錄。江蘇光遺傳鈣成像哪個好
想要對鈣離子的動態變化進行有效的檢測,鈣離子指示劑的選擇顯得尤為重要。鈣離子熒光指示劑在未結合鈣離子前幾乎無熒光,與鈣離子結合后,熒光強度xianzhu增強。利用這一原理,可以通過指示劑的信號強弱來觀察細胞內鈣離子濃度水平的變化。根據激發光波長范圍,鈣離子指示劑可以分為可見光激發和紫外光激發,而根據其工作原理又可以分為比率和非比率型。常見的鈣離子指示劑有以下幾種:紫外光激發Ca2+熒光探針、可見光激發Ca2+熒光探針、轉基因Ca2+指示劑。合肥熒光鈣成像nVoke2.0超微顯微鈣成像顯微鏡是研究活動動物神經活動必要儀器。
細胞內鈣離子作為重要的信號分子其作用具有時間性和空間性。當神經細胞興奮時,會產生一個電沖動,在此時,細胞外的鈣離子回流入該細胞內,促使這個細胞分泌神經遞質,神經遞質與相鄰的下一級神經細胞膜上的蛋白分子相結合,促使這個一級神經細胞產生新的電沖動。以此類推,神經信號便一級一級地傳遞下去,從而構成復雜的信號體系,形成了學習、記憶等大腦的高級功能。在哺乳動物神經系統中,鈣離子同樣扮演著重要的信號分子的角色。
在神經系統研究中,我們常使用鈣指示劑表征鈣離子濃度變化,以反映神經元的活動。常見的鈣成像方法有雙光子熒光成像和單光子熒光成像兩種,其中后者是研究腦神經活動的常用方法。但與雙光子成像相比,單光子成像更易受到來自神經元的高水平串擾,導致信噪比降低。不僅如此,采集活動信號時還易被來自近距離通過的軸突和樹突的信號所污染,造成的非特異性信號,這些均嚴重影響對神經元活動反應的精細成像。因而,在單光子熒光成像的基礎上,研究團隊在細胞核中表達遺傳編碼的鈣指示劑,從而消除神經纖維信號。但與經典的胞質鈣成像相比,鈣進入細胞核的要求降低了這種成像的時間精度。鈣信號在神經元功能調控及信息傳遞方面發揮著重要作用。
利用鈣成像技術記錄大腦活動。隨著功能光學成像技術的發展,神經學家們已經可以研究腦區和神經元內部的工作情況。功能鈣成像技術就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號和生理現象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細胞內游離鈣離子濃度,以此daibiao細胞的功能狀態。目前它被廣泛應用于實時監測一群相關神經元內鈣離子的變化,從而判斷其功能活動。該技術的出現使得科學家可以親眼目睹神經信號在神經網絡之中時間和空間上的傳遞穿梭。鈣成像系統支持聯網,基于網絡的軟件可讓您隨時隨地監控數據。神經細胞鈣成像哪里買
鈣離子成像可以追蹤神經元動作電位。江蘇光遺傳鈣成像哪個好
鈣離子通過參與多種細胞內信號傳導途徑來調控絕大多數類型神經元的功能。由于鈣離子信號在已知的細胞器結構中發揮其特定的功能,鈣離子成像顯得尤為重要。在神經系統中,由于神經元的多樣性,導致鈣離子功能也多樣化。在突觸前膜,鈣內流激發貯存神經遞質的神經小泡向胞外釋放;在突觸后膜,樹突棘內鈣水平瞬間升高,介導了突觸可塑性;在細胞核內,鈣信號能夠調控基因轉錄。現在常使用的鈣離子指示劑有化學性鈣離子指示劑(ChemicalIndicators)和基因編碼鈣離子指示劑(GeneticallyEncodedIndicators)兩類。江蘇光遺傳鈣成像哪個好