哥倫比亞大學ZuckermanMind大腦行為研究所的RuiM.Costa課題組于2020年10月7日在Cell雜志上發表了一篇題為AnAmygdalaCircuitMediatesExperience-DependentMomentaryArrestsduringExploration的文章，作者開發一種用于研究小鼠探索活動中瞬時停滯行為機制的新型實驗，通過行為分析、環路映射、滔博生物-Inscopix自由活動鈣成像顯微鏡結合光遺傳學手段，提供介導經驗依賴性的瞬時停滯行為的BLA神經元群體的jihuo和投射證據，表明BLA-CEA環路可以作為新穎/熟悉情境的檢測器和效應器，用于基于空間位置的熟悉程度來生成自定進度的行為停滯，這一響應對于動物對未知環境進行安全有效的探索是至關重要的。鈣成像系統具有單細胞分辨率的大視野的特征。深圳在體鈣成像nVoke2.0

紫外光激發Ca2+熒光探針Fura-2和Indo-1都是紫外光激發的雙波長Ca2+熒光指示劑，也是目前較常用的比率型鈣離子熒光探針。與其他代的熒光指示劑相比，它們的熒光信號更強，對Ca2+的選擇性也更強。比率指示劑會在與Ca2+結合后會改變吸收/發射特性。以雙波長激發指示劑Fura-2為例。如圖2所示，低Ca2+濃度下，Fura-2在~380nm處激發，高Ca2+濃度下，在~340nm處激發。光譜由兩個峰組成：左側較短波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而增大，右側較長波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而減小。通過340/380nm交替激發，獲取在510nm處對應的發射光熒光強度的比率，就可以對Ca2+濃度進行定量的測量。因為Fura-2結果準確，且不易被漂白，所以得到了普遍使用。重慶細胞鈣離子鈣成像inscopix對鈣離子的功能研究中，鈣指示劑是必不可少的工具。

鈣離子在很多生理性的活動中都發揮著重要作用，除了在肌肉細胞收縮中扮演著重要角色，鈣離子也是神經元活動的重要“風向標”之一：當神經元膜電位發生去極化，產生的動作電位傳導到神經元軸突末梢時，細胞膜上的電壓門控鈣離子通道打開，大量鈣離子內流，包含神經遞質的囊泡由突觸前膜釋放至后膜，下游神經元就得以接受到上游的信號。因此，鈣離子成像可以追蹤神經元動作電位，從而幫助我們了解神經元集群的活動，可以用于感知覺，學習記憶，社會性行為等各種各樣的研究中。

可見光激發Ca2+熒光探針與紫外光激發探針相比，可見光激發Ca2+探針具有更強的染料吸收性能，對Ca2+變化水平檢測敏感度也更高，能夠降低對活細胞的光毒性和樣品自發熒光以及光散射的干擾，且無光譜偏移。常使用的可見光激發Ca2+熒光探針有Fluo-3，Fluo-4，Rhod-2等，同時他們也都是非比率型指示劑。Fluo-3是常用的可見光激發Ca2+熒光指示劑之一，是典型的的單波長指示劑，比較大激發波長為506nm，比較大發射波長為526nm。它與Ca2+結合之前幾乎無熒光，結合后熒光會增加60至100倍，從而避免了細胞自身的熒光干擾。實際檢測時推薦使用的激發波長為488nm左右，發射波長為525～530nm。Fluo-3可以用在激光共聚焦顯微成像或流式細胞儀中。它還有一個升級版本Fluo-4，在相同Ca2+濃度下信號更強。鈣成像系統支持聯網，基于網絡的軟件可讓您隨時隨地監控數據。

鈣離子成像技術（Calciumimaging）是指利用鈣離子指示劑監測組織內鈣離子濃度的方法，常用于神經系統的研究，指示神經元內鈣離子的變化，提示神經元活動。其原理在于借助鈣離子濃度與神經元活動之間的嚴格對應關系，利用特殊的熒光染料或者蛋白質熒光探針（鈣離子指示劑，<spanlang=EN-US>Calciumindicator），將神經元中鈣離子的濃度通過熒光強度表現出來，并被顯微鏡捕捉，從而達到監測神經元活動的目的。鈣離子在神經元功能中起著重要的作用：它們作為細胞內的信號可觸發響應，如改變基因表達和突觸囊泡中神經遞質的釋放。由于細胞內有離子泵在各種信號刺激下選擇性地運輸這些離子，胞內鈣濃度是高度動態的。鈣成像利用鈣離子流的優勢，在活神經細胞上直接可視化鈣信號。想要同時觀察軸突和樹突的鈣離子信號，大視野是很重要的。上海神經元鈣成像動物行為學

鈣成像數據采集盒擁有 2TB 存儲空間，可選擇以太網或 Wi? 方式連接電腦。深圳在體鈣成像nVoke2.0

轉基因Ca2+指示劑：轉基因技術和光遺傳技術的飛速發展，催生了基因編碼的Ca2+指示劑（GECIs）。它們不依賴于熒光染料，可以靶向特定的組織，如神經細胞、心肌細胞、T細胞等，并且可以避免熒光指示劑帶來的的許多問題，是監測轉基因動物體內鈣離子的一個極好的工具。個基因編碼的鈣離子指示劑Cameleon早在1997年就發表了。它是利用與鈣離子結合后發生結構變化，作為供體的CFP和作為受體的YFP之間產生FRET的原理。2000年，GCaMP誕生了。它是增強型綠色熒光蛋白（EGFP）和鈣調蛋白（結合鈣離子）、鈣調蛋白結合肽M13組成的，結合鈣離子后，鈣調素-M13相互作用引起GFP空間結構變化，發出綠色熒光（圖5）。GCaMP的問世有著**性的意義，它改變了我們觀察神經元群體活動的方式，讓科學家們可以在成千上萬的細胞中，看到哪些神經元在放電，它們放電的模式和規律是怎樣的，從而進一步探索各種內在的神經機制。深圳在體鈣成像nVoke2.0