電壓鉗的原理∶用兩根前列直徑0.5um的電極插入細胞內,一根電極用作記錄電極以記錄跨膜電位,用另一根電極作為電流注入電極,以固定膜電位。從而實現固定膜電位的同時記錄膜電流。電位記錄電極引導的膜電位(Vm)輸入電壓鉗放大器的負輸入端,而人為控制的指令電位(Vc)輸入正輸入端,放大器的正負輸入端子等電位,向正輸入端子施加指令電位(Vc)時,經過短路負端子可使膜片等電較,即Vm=Vc,從而達到電位鉗制的目的,并可維持一定的時間。Vc的不同變化將導致Vm的變化,從而引起細胞膜上電壓依賴性離子通道的開放,通道開放引起的離子流反過來又引起Vm的變化,致使Vm≠Vc,Vc與Vm的任何差值都會導致放大器有電壓輸出,將相反極性的電流注入細胞,以使Vc=Vm,注入電流的大小與跨膜離子流相等,但方向相反。因而注入的電流被認為是標本興奮時的跨膜電流值(通道電流)。在膜電位改變時,在電場的作用下,重新分布導致通道的關閉,同時有電荷移動,稱為門控電流。單通道膜片鉗參數
1980年,Sigworth、Hamill、Neher等在記錄電極內施加負壓吸引,得到了10~100GΩ的高阻封接(gigaseal),降低記錄噪聲,實現了單根電極既鉗制膜電位又記錄單通道電流。獲1991年Nobel獎。1955年,Hodgkin和Keens應用電壓鉗(Voltageclap)在研究神經軸突膜對鉀離子通透性時發現放射性鉀跨軸突膜的運動很像是通過許多狹窄空洞的運動,并提出了"通道"的概念。1963年,描述電壓門控動力學的Hodgkin-Hx上模型(簡稱H-H模型)榮獲譜貝爾醫學/生理學獎。1976年,Neher和Sakmann建立膜片鉗(Patchclamp)按術。1983年10月,《Single-ChannelRecording》一書問世,奠定了膜片鉗技術的里程碑。1991年,Neher和Sakmann的膜片鋪技術榮獲諾貝爾醫學/生理學獎。多通道膜片鉗電流鉗制膜片鉗80%的工夫在于刺備細胞。
1976年德國馬普生物物理化學研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產生了膜片鉗技術。1980年Sigworth等在記錄電極內施加5-50cmH2O的負壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),明顯降低了記錄時的噪聲實現了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破。1981年Hamill和Neher等對該技術進行了改進,引進了膜片游離技術和全細胞記錄技術,從而使該技術更趨完善,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時間分辨率。1983年10月,《Single-ChannelRecording》一書問世,奠定了膜片鉗技術的里程碑。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻,榮獲1991年諾貝爾醫學和生理學獎。
膜片鉗技術原理:膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來(見右圖),由于電極前列與細胞膜的高阻封接,在電極前列籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內開放所產生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就單一離子通道電流膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯系在一起,同時又將神經科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯系、互不滲透,阻礙人們較全認識能力的弊端。這一技術的發現和基因克隆技術并架齊驅,給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。細胞膜由脂類雙分子層和和蛋白質構成。
在心血管藥理研究中的應用,隨著膜片鉗技術在心血管方面的廣泛應用,對血管疾病和藥物作用的認識不僅得到了不斷更新,而且在其病因學與藥理學方面還形成了許多新的觀點。正如諾貝爾基金會在頒獎時所說:“Neher和Sadmann的貢獻有利于了解不同疾病機理,為研制新的更為的藥物開辟了道路”。創新藥物研究與高通量篩選,目前在離子通道高通量篩選中主要是進行樣品量大、篩選速度占優勢、信息量要求不太高的初級篩選。近幾年,分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎的兩大主流技術市場。將電生理研究信息量大、靈敏度高等特點與自動化、微量化技術相結合,產生了自動化膜片鉗等一些新技術。膜片鉗技術實現了小片膜的孤立和高阻封接的形成。多通道膜片鉗電流鉗制
膜片鉗技術原理膜片鉗技術是用玻璃微電極接觸細胞,形成吉歐姆(GΩ)阻抗。單通道膜片鉗參數
在計算機和互聯網的急速發展到整個世界的背景下,儀器儀表也開始向網絡化突進,結合新的科技設備,通過廣域網和局域網直接操控儀器儀表,對公司的管理,經營一體化,應用模式的分析等各大方面產生影響。有限責任公司(自然)企業通過網絡這個平臺與客戶直接的交流,突破了世界和空間的限制,行家遠程操控對儀器儀表進行維護和分析。高科技的產品也隨之而來。隨著儀器儀表和計算機的完美結合,為了更好地滿足人們對精神世界的需求,體驗多維世界給人們帶來的快樂,儀器儀表的虛擬化開始發展。身臨其境接受客觀實物,給美又增添了一絲創意。儀器儀表行業已經連續多年保持了經濟高位運行的態勢。即使當全球受金融風暴的影響,各個行業經濟東圃有所放緩,但從全景發展情況看來,儀表行業的增長速度并沒有放緩。我國現有有限責任公司(自然)企業數千多家,已經形成門類品種比較齊全,具有一定技術基礎和生產規模的產業體系。但同時業內**也指出,雖然我國測試儀器產業有了一定的發展,但遠遠不能滿足國民經濟各行各業日益增長的迫切需求。單通道膜片鉗參數
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