光學顯微鏡和電子顯微鏡本質的區別在于，光學顯微鏡：用的是可見光電子顯微鏡：用的是高頻電子射波有什么區別，在于一個基本的原理，光的衍射。。。光波是一個有趣的東西，其中有一項，如果物體的體積小于光的波長，光一般可以繞過去，不發生明顯變化。也就是說，有這個物體和沒這個物體，在這種情況下，光是不會發生明顯改變的。可見光的波長（肉眼）：380～780納米，也就是，如果比380納米還要小的東西，用光學顯微鏡，無論你放大多少倍，也是看不見的。因為光繞過去了。。。光的衍射為了克服這個問題，科學家用波長更短的光去照射物體，也是就被觀測物。比如10納米級的光，這樣，就能看到我們用肉眼無論如何都看不見的東西。這就是電子顯微鏡多說一句，光速是不變的。光速=頻率×波長。波長越短，頻率越大。。頻率越大，光波的能量越大。這就是為什么電子顯微鏡的功率越大，能看到的東西越小。顏色取決于物體能反射光的波長的長短當你看到的物體小于較小可見光的波長，那它就是沒有顏色的。。。因為顏色是肉眼對于可見光頻率在大腦中的投影。。。。所以只能把他們統一變為黑白。。。沒有顏色不是透明的意思，它們不是肉眼可見顏色的定義中包含的。雙光子顯微鏡在各領域研究中已有許多成功實例。國內2PPLUS雙光子顯微鏡用途

隨著技術的發展，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優化，結合它的特點，大致可以分成深和活兩個方面的提升。要想讓激發激光進入更深的層面，大致可從兩個方面入手，裝置優化與標本改造。關于裝置優化，我們可以把激光束變得更細，使能量更加集中，就能讓激光穿透更深。關于標本，其中影響光傳播的主要是物質吸收和散射，解決這個問題，我們需要對樣本進行透明化處理。一種方法是運用某種物質將標本浸泡，使其中的物質（主要是脂質）被破壞或溶解。另一種方法是運用電泳將脂質電解，讓標本“透明度”提高。國內ultima雙光子顯微鏡分辨率成像平臺倒置雙光子顯微鏡啟用顯微鏡自帶調焦設備。

雙光子顯微鏡的應用由于適合動態成像，雙光子顯微鏡一經問世便很快應用于神經科學、遺傳發育、藥物代謝等領域。雙光子顯微鏡能夠在細胞甚至是亞細胞水平上對***神經細胞的形態結構、離子濃度、細胞運動、分子相互作用等進行直接成像監測，而且能夠進行光裂解、光轉染和光損傷等光學操縱。同時，雙光子顯微鏡能動態監測**在體內的生長和轉移，并可對**治療過程中*細胞的變化進行實時觀測和評估。隨著光學技術、熒光探針技術、計算機成像技術的發展，雙光子顯微技術會得到更大提升和更廣的應用，未來不僅用于基礎研究，也將擴展到臨床應用。

使用雙光子顯微鏡（2PM）可以以亞細胞分辨率對鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器成像，從而測量不透明大腦深處的活動；成像膜電壓變化能直接反映神經元活動，但神經元活動的速度對于常規的2PM來說太快。目前電壓成像主要通過寬場顯微鏡實現，但它的空間分辨率較差并且只是于淺層深度。因此要在不透明的大腦中以高空間分辨率對膜電壓變化進行成像，需要較提高2PM的成像速率。FACED模塊輸出處的子脈沖序列可以看作從虛擬光源陣列發出的光，這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成了一個空間上分離且時間延遲的焦點陣列。然后將該模塊并入具有高速數據采集系統的標準雙光子熒光顯微鏡中，如圖2所示。光源是具有1MHz重復頻率的920nm的激光器，通過FACED模塊可產生80個脈沖焦點，其脈沖時間間隔為2ns。這些焦點是虛擬源的圖像，虛擬源越遠，物鏡處的光束尺寸越大，焦點越小。光束沿y軸比x軸能更好地充滿物鏡，從而導致x軸的橫向分辨率為0.82μm，y軸的橫向分辨率為0.35μm。雙光子顯微鏡有哪些應用呢？

和很多偉大的科學發明一樣，雙光子顯微鏡的出現也有一點偶然，但正是那瞬間的靈感為生物科學尤其是神經科學帶來了一種**性的成像技術：雙光子激發熒光顯微鏡。1990年初，當WinfriedDenk剛從康奈爾大學博士畢業準備前往瑞士讀博后時，他看了一本關于激光掃描顯微鏡的書，從中了解到非線性光學效應——強光和物質的相互作用。當時，Denk有同事研究生物樣品中的鈣離子但苦于沒有強大的紫外激光器和光學元件，于是他就想到如果使用雙光子吸收就能夠繞開紫外，換言之，與其通過一個紫外光子激發標記的鈣離子，通過兩個雙倍波長的可見光光子也能激發相同的熒光。如果已經有了飛秒光，就可以幾套雙光子顯微鏡共享一臺，只需分光即可。國內ultima雙光子顯微鏡分辨率

雙光子顯微鏡不需要共聚焦細孔，提高了熒光檢測效率。國內2PPLUS雙光子顯微鏡用途

在傳統寬場顯微鏡中，來自標本不同縱深的光線都可投射到同一焦平面（感光元件）上，所以其成像是整個樣品的重疊像，沒有縱向分辨能力。單光子激光共聚焦顯微鏡用***有效濾除了雜散光，分辨率有了本質上的提高，擁有了對樣品的特定焦平面精細成像的能力，可以進行三維成像、動態成像等。然而，***在濾除雜散光的同時也將大部分來自焦平面的熒光濾除了，只有很弱的熒光到達檢測器。若要提高信號強度，需要加大激發光功率，這又會導致對活細胞的光毒性和熒光分子的光漂白增加。雙光子顯微鏡比較大的優勢來源于其雙光子光源的非線性光學效應，與單光子共聚焦顯微鏡比較大的不同在于無須使用***限制光學散射，其具體優勢如下。國內2PPLUS雙光子顯微鏡用途

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