用于外泌體提取的體液收集注意事項：1、抽血技巧。操作要輕柔迅速。試管可翻轉8-10次使樣本與抗凝劑混勻，避免劇烈搖晃?；靹蚝?，將試管固定垂直放置于離心分離器，在頂部記錄抽血的準確時間，因為抽血與離心之間的時間間隔可能是一個影響因素。外泌體在抽血后30分鐘內是比較穩定的，若時間過長將導致外泌體數量增加。血小板極易因抽血時的物理因素而并釋放出外泌體，其中包括接觸、壓力、切力。2、抽血時間。除了血液黏度，體內血液的各項指標在1天中變化很大。生理節律會對血小板的產生很大的影響。白細胞的募集和循環系統中促炎細胞和細胞會隨時間變化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會隨時間變化。目前尚無設計較好的實驗對證實不同時間血液中外泌體的變化，故應在相同的時間采集樣本。目前飲食是否會對EV產生影響尚未可知，但是由于脂蛋白可運載RNA且食物的攝取可以影響循環脂蛋白顆粒的類型、數量和作用，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時間進行。獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時。成都正規外泌體提取試劑價格

將濃縮液加至20mmol/LTris/30%蔗糖/45%蔗糖(pH7.4)的密度梯度液上行4℃超速離心100000×g(水平轉子SW-41)8h,吸取位于蔗糖之上的顏色明顯較深條帶的液體約5mL,以10倍PBS稀釋混勻后再次用100-ku超濾離心管(Millipore)濃縮至5mL,將濃縮液重新以10倍PBS稀釋后4℃超速離心100000×g(角轉子TYPE50.2)4h,收集離心管底部約1mL液體及極微量沉淀(來自2×107個細胞)以20mLPBS重懸即為胞外體,用0.22μm過濾膜除菌后凍存于-80℃備用。（該步驟參考文獻“腫瘤細胞來源胞外體的分離鑒定與功能檢測”）優點是：分離得到的外泌體純度很高。缺點是：步驟繁瑣、耗時耗力、對離心時不好把握。成都外泌體提取試劑廠家超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。

這一特性已被應用于開發心血管疾病，神經系統疾病和一些病癥的分子診斷方法，也在肝腎肺相關疾病中進行研發測試。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮，使外泌體懸浮于液體上層，外泌體與神經退行性疾?。和饷隗w可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現象也在PD和ALS疾病中發現。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein，ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷（應用潛能）：外泌體生成機制表明，通過分析外泌體的組分，可以幫助識別其來源的細胞類型。

聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集細菌，現在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發表文章時易受質疑。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。

外泌體研究的主要應用：外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換，從而導致大量新生血管的生成，促進了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥。一些病癥轉移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血?。ˋML）細胞的增殖、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細胞，以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉移過程。免疫。β細胞將含有蛋白質和miRNA的外泌體釋放到細胞外，并可轉移到其他代謝部位或免疫內皮細胞，有利于維持葡萄糖體內平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉移到內皮細胞導致了內皮細胞的損傷促進動脈硬化。分子標記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發現循環EVs的水平上升外泌體提取色譜法是利用根據凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關系而對溶質進行分離的分析的方法。上海正規外泌體提取試劑報價

通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。成都正規外泌體提取試劑價格

外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體，可通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成多泡內涵體，內涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間，其中包含RNA、蛋白質、microRNA等多種物質，存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發現至今已有30多年的歷史，雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”，所以才被排出來，但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞。如今，研究已經發現外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、一些病癥細胞發生的發展、神經細胞信號轉導過程中都發揮著重要作用。利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。成都正規外泌體提取試劑價格