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與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,不形成雙螺旋結構,但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對外,G-U也可以配對。在細胞中,根據結構功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉運RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質的模板,內容按照細胞核中的DNA所轉錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉運者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質合成的工作場所。植物花總RNA提取試劑盒:效去除植物花組織中的多糖、多酚類等雜質。南京太原RNA提取試劑
如果把一個細胞比作一個城市,那么DNA就像是一個管理人員,它坐在細胞核內,監(jiān)視著“細胞城”的一舉一動,像哪里細胞膜破了需要修補,什么時候需要合成蛋白質,顯而易見,光靠我們DNA管理人員一個人自然忙不過來啦,于是我們的DNA管理人員決定給自己找一些“打工仔”,它們就是RNA,但是近年來越來越多的研究發(fā)現,這些RNA似乎遠遠不止一個普通默默無聞的“公務員”那樣簡單,它們在基因表達中發(fā)揮著不亞于DNA的巨大的作用,如2006年諾貝爾獎生理/醫(yī)學獎就頒發(fā)給了RNA干擾的兩位發(fā)現者。RNA干擾現象的發(fā)現為遺傳研究提供了一種強大的研究手段,這也說明這些對RNA的研究有著巨大的前景.而作為南大較好科研接班人的我們自然也不能甘于人后,于是我們決定從酵母RNA的提取開始做起。無錫RNA提取試劑哪家便宜植物RNA提取試劑:采用高效、專一結合核酸的離心吸附柱和獨特的緩沖系統。
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,使用Takara公司的樣品保護劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時也可以有效解決組織、細胞樣品的短時間保存及運輸問題。此外,如果將不同時期收集的樣品都預先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達的時序變化,減少實驗組間的誤差。
植物RNA提取:植物組織中,富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級代謝產物,或RNase的活性較高。這些物質在細胞裂解后與RNA緊密結合形成難溶復合物或者膠狀沉淀,很難將其去除。所以我們在提取植物組織時,要選取針對植物的試劑盒,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨,研磨過程中液氮要及時補充,避免樣品融化,研磨后的樣品應迅速加入裂解液中震蕩混勻,避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,則應適當減少提取用量,否則組織研磨及裂解不徹底,會使提取的RNA產量較低。3、含水分較多的植物組織例如石榴果實、西瓜果實、桃子果實等則應當適當提高樣本量(可選100~200mg)。4、植物組織,如植物葉片、根莖、堅硬的果實等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,再繼續(xù)進行提取步驟。常規(guī)的組織勻漿機對植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用。能迅速破碎細胞,壓制細胞釋放出的核酸酶。
RNA提取真正需要注意的要點:你的植物組織樣本采樣、保存正常嗎?組織裂解充分了嗎?組織起始量是否過大?起始量過大的話,他們得帶進去多少RNase呀,導致裂解液不能充分壓制內源性的RNase,失敗就在預料之中!你的細胞活性好嗎?細胞都到衰亡期了,你提什么RNA呀;細胞加的那么多,破壁不充分,怎么裂解的好呢,他們本身得帶進去多少內源性RNase污染呀!轉移液體時吸到沉淀了嗎?吸水相時碰到中間層了嗎?乙醇干燥凈了嗎?裂解樣本的過程是重中之重液氮研磨(手工):要先加液氮預冷一下研缽,然后研磨,研磨過程要保證研缽中一直有少量液氮,研磨完成一個樣本后,直接加入裂解液渦旋震蕩后放常溫,或者直接丟到液氮中,全部研磨后一起加裂解液。液氮研磨(研磨儀):研磨模塊丟到液氮中預冷,直到沒有氣泡冒出視為預冷完畢。在2ml圓底離心管(不需要無酶管,液氮研磨中不破裂就好)中加入5mm鋼珠一粒,放進樣品,投入液氮中預冷。把所有預冷好的離心管**研磨模塊中,放進研磨機震蕩20-30秒。完成后馬上加裂解液,渦旋。RNA提取試劑銷售廠家總共可以使用該試劑盒進行50次標準提取。RNA提取試劑注意事項:硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細胞和組織中提取總RNA的試劑。青島RNA提取試劑單價
RNA提取試劑注意事項:使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。南京太原RNA提取試劑
病毒RNA提取試劑盒可以快速從全血、血清、血漿、口腔拭子等生物液體中提取病毒RNA。在此試劑盒中,使用了核酸助沉劑--carrierRNA。核酸助沉劑不光有利于微量RNA的沉淀,同時也可以減少RNA的降解。本試劑盒操作簡捷方便。30-40min就可以完成一個樣品的提取,得到純凈的RNA。RNA可以使用RT-PCR,real-timeqPCR,Northernblot,Dotblot,poly(A)+selection,體外翻譯,和分子克隆等實驗。此外,裂解液VLS也是病毒RNA樣品的一個很好的保存液。儲存在裂解液中的病毒RNA(在病毒樣品中加入3倍體積裂解液后劇烈渦旋裂解樣品)可以在-20℃情況下穩(wěn)定至2個月;在-80℃情況穩(wěn)定半年;同時,儲存在裂解液中的樣品在運輸過程中,也可以在4℃穩(wěn)定一日;-20℃穩(wěn)定一周。南京太原RNA提取試劑