使用方法：1)細胞超凈臺無菌環境，1.5mlEP管內加入細胞混懸劑均勻混懸細胞，細胞終濃度為5×106個/ml，混懸液體積為200μl。細胞凍存劑冰水混合物中預冷，逐滴加入細胞凍存劑800μl，細胞混懸劑與細胞凍存劑的體積比控制在1:4。2)開啟程序性降溫，降溫速率為1℃/min，較后降溫至-80℃以下進行凍存。將比較例1凍存后細胞的復蘇率與實施例5凍存后細胞的復蘇率進行對比，具體結果如附圖1所示，可見采用本發明的凍存方法能夠明顯提高細胞的復蘇率。其他實施例通過與比較例1進行比較，也得到相同的試驗結果。本發明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細胞復蘇率，同時還可減少不同批次細胞凍存復蘇率不穩定、以及避免由血清中的支原體，細菌，朊細菌及其他細菌顆粒引發的污染。無血清細胞凍存液的優勢：無需液氮，-80℃冰箱長期凍存。溫州無血清細胞凍存液廠家推薦

細胞凍存注意事項：1、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養液，而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。3、加培養基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度溫州正規無血清細胞凍存液廠家直銷無血清細胞凍存液產品性能：細胞凍存是細胞實驗中的一個常規技術。

細胞凍存概念：細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。

細胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細胞培養液;2.取對數成長期的體細胞，除去舊細胞培養液，用PBS清理。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養皿表層)把單面生長發育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm，5min;5.除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱，記數，調整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字，凍存時間及作業者;8.凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可快速滲入液態氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進-20℃電冰箱2h，隨后放進-70℃電冰箱中留宿，取下凍存管，移進液氮容器內。無血清細胞凍存液產品性能：用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途，無動物源組分。

細胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細胞培養液;2.取對數成長期的體細胞，除去舊細胞培養液，用PBS清理。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養皿表層)把單面生長發育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm，5min;5.除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱，記數，調整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字，凍存時間及作業者;8.凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可快速滲入液態氮中。隨著細胞凍存數量增加，凍存流程簡化也成為必然趨勢，因此無血清非程序降溫凍存液應運而生。徐州深圳無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液的優勢：無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分。溫州無血清細胞凍存液廠家推薦

細胞冷凍的原理：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。溫州無血清細胞凍存液廠家推薦