細胞轉染之PEI轉染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養皿總面積的70－90％）。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h，當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前2h換液（用1.5ml無血清培養基置換舊的培養基）。注：PEI轉染法對細胞生長有克制作用，在換液前細胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉染。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養皿用240μl反應總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質粒DNA（總量1-3μg為佳），混勻后加入等體積PEI工作液，充分混勻后室溫靜置20-30min，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育。在現生命可續研究中，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程。廈門昆明細胞高效轉染試劑

細胞轉染，你至少要掌握以下幾點：胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越普遍。可分為瞬時轉染，穩定轉染等。瞬時轉染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子和其他調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72h內分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。穩定轉染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，通常需要一些選擇性標記反復篩選得到穩定轉染的同源細胞系。南昌正規細胞高效轉染試劑平均價格形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附。

轉染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明，對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異。

轉染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明，對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異可以使用一些營養豐富的無血清培養基，或者在轉染培養基中使用血清。

DNA細胞轉染步驟：1.提前現在細胞鋪板提前現在將細胞種植在24孔板中，以轉染時細胞密度在60％左右為宜。2.轉染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋，充分混勻，制成DNA稀釋液。注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM或1640。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋，充分混勻，制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上），室溫靜置15分鐘。轉染復合物制備完成。⑷將轉染復合物加入到含細胞和完全培養基的培養容器上，輕柔混勻。注意：①對本試劑，采用含血清的全培養基有助于提升轉染效率。脂質體可以和帶負電荷的核酸結合后重新形成復合物。珠海細胞高效轉染試劑供應商

在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。廈門昆明細胞高效轉染試劑

細胞轉染操作方法：轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，細菌轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點廈門昆明細胞高效轉染試劑