細胞轉染實驗簡介實驗步驟：1、細胞傳代(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。(2)棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液，消化1分鐘(37。C，5%CO2)。用手輕拍培養瓶壁，觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養基終止反應。(5)用頭多次吹吸，使細胞完全分散開。(6)將培養液裝入離心管中，1000rpm離心5min。(7)用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。(8)將合適體積完全培養液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養皿中，使其均勻分布。(9)將培養皿轉入CO2培養箱中培養，第二天轉染。使用基質珠做為固相支持可以使貼壁細胞懸浮生長。南昌正規細胞高效轉染試劑產品介紹

轉染的注意事項：培養基中的物品物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化，這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。比如，新鮮融化的NIH3T3細胞比傳代8次的細胞表現出更高的轉染效率，融化細胞的進一步傳代并沒有降低轉染效率。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果廣州正規細胞高效轉染試劑廠家推薦在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。

細胞轉染常用步驟：1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。5.加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。6.到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24－48小時

細胞轉染的注意事項：細胞狀態這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態較好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態都會發生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果?；蛘?，幾種來源于經篩選，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現在有售~對大多數細胞而言，均需要在轉染當天或前現在鋪板，第二天上午進行轉染。

細胞轉染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量~細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。細胞高效轉染試劑產品介紹

來指示細胞中目標基因是否存在，這樣的報告基因一般可以在轉染后一兩天內檢測到。南昌正規細胞高效轉染試劑產品介紹

細胞轉染的常用方法：細菌轉染：原理：對于用脂質體不能實現轉染的細胞，可以采用細菌轉染?？捎糜诘鞍踪|過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉染細胞、原代細胞的穩定性轉染。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌→采用非細菌法轉染包裝細胞系，擴增并分離得到重組細菌顆?！兓⒌味毦骸D導目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養物中的細菌，并加入新鮮培養基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。南昌正規細胞高效轉染試劑產品介紹