胎牛血清對(duì)細(xì)胞貼壁中的作用:在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),大部分來自實(shí)體組織感官的細(xì)胞會(huì)貼壁。它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)時(shí),也是與其他細(xì)胞或者細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合的,貼壁對(duì)維持細(xì)胞的良好形態(tài)和促進(jìn)細(xì)胞的增殖有益處。有人培養(yǎng)許旺細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)貼壁良好的細(xì)胞,其增殖率也較高。人的造血干細(xì)胞培養(yǎng),更是需要...
如何區(qū)別真假胎牛血清:1、血紅蛋白,標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。2、pH,國(guó)產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體...
胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。所有胎牛...
胎牛血清:胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞生長(zhǎng)天然的培養(yǎng)基,它為細(xì)胞提供生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個(gè)領(lǐng)域:蛋白質(zhì)組學(xué)、同位素標(biāo)記、細(xì)胞通訊以及報(bào)告基因細(xì)胞...
為什么要熱滅活胎牛血清?胎牛血清加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。開啟的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,開啟淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活胎牛血清。為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)少量沉...
胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)證明,經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清,對(duì)于大多數(shù)的細(xì)胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或完全沒有任何作用,甚至可能因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,從而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成...
細(xì)胞培養(yǎng)用到的胎牛血清需要滅活嗎:細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清是不可或缺重要培養(yǎng)基,胎牛血清中含有諸多細(xì)胞生長(zhǎng)因子,維生素,氨基酸等物質(zhì)。我們常會(huì)看到胎牛血清的標(biāo)注上有對(duì)產(chǎn)品滅活也有沒有滅活的,胎牛血清為什么不需要熱滅活便可以使用。事實(shí)上,熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等...
胎牛血清(FBS)是來自胎牛的凝結(jié)血液的液體部分,不含細(xì)胞、纖維蛋白和凝血因子,但含有大量對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)至關(guān)重要的營(yíng)養(yǎng)和大分子因子。牛血清白蛋白是FBS的主要成分。FBS中的生長(zhǎng)因子對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞的維持和生長(zhǎng)至關(guān)重要。FBS還含有多種小分子,如氨基酸、糖、脂質(zhì)和Ho...
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經(jīng)過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對(duì)血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化...
胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo):一、內(nèi)的毒性,內(nèi)的毒性是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的特有成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時(shí),才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)的毒性直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)的毒性含量越低,對(duì)細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代;內(nèi)的毒性含量過高,會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)...
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)的數(shù)據(jù)如何處理:1.內(nèi)面向外式膜片細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細(xì)胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對(duì)通道活動(dòng)的影響。但實(shí)驗(yàn)中難以改變膜外側(cè)物質(zhì),且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細(xì)胞內(nèi)鈣的...
血清中絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?1.將冷凍保存的血清取出后,置4℃冰箱靜止過夜;2.待血清融化后,上下顛倒,輕輕混勻,繼續(xù)4℃2-3小時(shí);3.輕輕吸取上層血清,分裝,余底下50ml左右;4.低速離心5分鐘,去掉沉淀。若解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該怎么處...
選購FBS應(yīng)考慮哪些標(biāo)準(zhǔn)?產(chǎn)品檢測(cè),每款FBS在生產(chǎn)上市之前,必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)。質(zhì)控環(huán)節(jié)必不可少,以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格,而血清產(chǎn)品分析證書(COA)就是FBS質(zhì)控的重要體現(xiàn)。在COA中,常規(guī)的檢測(cè)指標(biāo)包括內(nèi)的毒性、總蛋白、細(xì)菌、病毒等,另外總...
如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?未拆封的血清,一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃,在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用,若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi),再放回冷凍。將血清從冷凍冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使...
胎牛血清FBS的處理方法?胎牛血清FBS一般需要冷凍保存,在-5到-20°C之間,并且可以在2到8°C的溫度下解凍。將血清等分并冷凍在較小的部分(通常為50ml試管)中通常很有用,以避免多次冷凍和解凍循環(huán)。有時(shí),一些FBS等分試樣在冷凍溫度下仍保留在液體中。這...
胎牛血清的作用:胎牛血清提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的Hormone,胎牛血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。胎牛血清提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,胎牛血清能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。有些情況下結(jié)合蛋白...
如何區(qū)別真假胎牛血清:免疫球蛋白,國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),結(jié)果也很不準(zhǔn)確,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出時(shí)的牛齡情況,國(guó)產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進(jìn)口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。其...
如何區(qū)別真假胎牛血清:1、血紅蛋白,標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。2、pH,國(guó)產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體...
胎牛血清:胎牛血清是通過母牛剖腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采的血獲得的新鮮胎牛全血,經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細(xì)胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體,后經(jīng)生產(chǎn)使用多級(jí)高置流膜過濾技術(shù)和三級(jí)0.1μm終端微濾方法處理后,常用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)...
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:胎牛血清適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)(同位素標(biāo)記研究細(xì)胞代謝)適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選,避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎(chǔ)上進(jìn)行加工的。胎牛血清在無菌條件下要經(jīng)過0.1微米膜三重過濾,要進(jìn)行一系列的檢測(cè),包括理化性質(zhì)檢查(如滲透...
膜片鉗系統(tǒng)有如下應(yīng)用局限性(1)光能應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的紀(jì)錄,因此大部分的紀(jì)錄對(duì)象為化細(xì)胞,而對(duì)于需要貼壁生長(zhǎng)的大多數(shù)正常細(xì)胞,現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)就無法紀(jì)錄;(2)在紀(jì)錄對(duì)象上,目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀(jì)錄胞膜形狀平整飽滿的細(xì)胞,大部分是工具細(xì)胞如化細(xì)胞,此類細(xì)胞有...
選購FBS應(yīng)考慮哪些標(biāo)準(zhǔn)?產(chǎn)品檢測(cè),每款FBS在生產(chǎn)上市之前,必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)。質(zhì)控環(huán)節(jié)必不可少,以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格,而血清產(chǎn)品分析證書(COA)就是FBS質(zhì)控的重要體現(xiàn)。在COA中,常規(guī)的檢測(cè)指標(biāo)包括內(nèi)的毒性、總蛋白、細(xì)菌、病毒等,另外總...
冷凍電子顯微技術(shù)主要包括單顆粒冷凍電鏡技術(shù)和冷凍電子斷層掃描技術(shù)。單顆粒冷凍電鏡技術(shù)首先捕獲大量隨機(jī)分布的同一種生物樣品的二維圖像,然后通過圖像處理算法解析其三維結(jié)構(gòu)。近年來,隨著冷凍電鏡設(shè)備和計(jì)算機(jī)軟硬件的快速發(fā)展,特別是隨著直接電子探測(cè)器在冷凍電鏡中的應(yīng)用...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備:PCR引物設(shè)計(jì),PCR反應(yīng)中有兩條引物,即5′端引物和3′引物。設(shè)計(jì)引物時(shí)以一條DNA單鏈為基準(zhǔn)(常以信息鏈為基準(zhǔn)),5′端引物與位于待擴(kuò)增片段5′端上的一小段DNA序列相同;3′端引物與位于待擴(kuò)增片段3′端的一小段DNA序列互補(bǔ)。引物設(shè)計(jì)...
Real-time PCR鏈反應(yīng)的常見問題分析與解決方法:反應(yīng)緩沖液未完全融化或未充分混勻。確保反應(yīng)緩沖液融化完全并徹底混勻。引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。引物量過多。減少反應(yīng)體系中引物的用量。模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)
胎牛血清:胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、無機(jī)物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。其中不含細(xì)胞、纖維蛋白和凝血因...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)生物學(xué)研究的歷史中占據(jù)了重要的地位。以此為基礎(chǔ)發(fā)展出包括Real-time PCR在內(nèi)的多項(xiàng)應(yīng)用技術(shù)。自誕生后Real-time PCR技術(shù)持續(xù)發(fā)展,從簡(jiǎn)單的增擴(kuò)到整個(gè)PCR過程,Real-time PCR表現(xiàn)出比PCR更敏感、更明確的定量分析特...
胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)證明,經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清,對(duì)于大多數(shù)的細(xì)胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或完全沒有任何作用,甚至可能因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,從而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成...
Real-time PCR-傳統(tǒng)定量PCR:1)內(nèi)參照法:在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電...
Real-time PCR鏈?zhǔn)椒磻?yīng):每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶,不但操作煩瑣,而且價(jià)格昂貴,制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發(fā)現(xiàn)對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技...